急性脑梗死血小板活化状态的检测及临床意义

[摘要] 目的 探讨急性脑梗死发病不同时期中血小板的活化状态以及各项检测指标的相互关系与临床意义。 方法 采用FCM测定52例脑梗死患者发病的急性期（发病1～3 d）和稳定期（治疗的10～14 d）血小板CD62p和CD63表达率，用玻球法测定PAdT，智能血液凝集仪测定PAgT，同时检测正常对照组30例。 结果 脑梗死急性期CD62p和CD63表达率较稳定期及正常对照组显著上调（P＜0.01）；待病情稳定时两者表达均明显下降，但亦较正常对照组增高（P＜0.01），且CD62p和CD63表达呈著正相关（r=0.788，P=0.003）；PAdT和PAgT在脑梗死急性期亦较正常对照组显著升高（P＜0.01），稳定期则降至正常水平。 结论 CD62p、CD63的表达与PAdT、PAgT随脑梗死病情演变而变化，两者呈一致性，共同参与脑梗死发生、发展病理过程；CD62p、CD63表达比PAdT、PAgT能更加敏感而准确地反映出血小板活化状态，且具有较高的一致性，可作为ACI诊断、病情监测及判断预后的重要指标之一。

[关键词] 脑梗死；P-选择素；溶酶体蛋白；血小板粘附率；血小板聚集率

[中图分类号] R446.11+2   [文献标识码] A   [文章编号] 2095-0616（2012）12-108-03

The detection of the platelet activation status of the acute cerebral infarction and its clinical significance

HU Ying1  ZHU Lanyu2  ZHANG Dong3  YU Zengguo2

1.Department of Laboratory, the 210th Hospital of People""s Liberation Army,Dalian 116021,China;2.Department of Laboratory, Dalian University of Medicine, Dalian 116622,China; 3. Department of Laboratory, Dalian City Chinese Medicine Hospital, Dalian 116000,China

[Abstract] Objective This article studies on the platelet activation status during the different phases of acute cerebral infarction and the relationship of indicators in various detections and tells us the clinic significance of the research. Methods Determining the expression level of the p-selectin(CD62P)and lysosome membrane protein(CD63)of platelet by FCM during the acute phase(1～3 d after the occurrence)and the stable phase(10～14 d of the treatment)of 52 cases of cerebral infarction,determining the PAdT by glass ball method, and determining the PagT by intelligent blood coagulation instrument and meanwhile detect 30 cases of normal control group. Results In the acute phase of cerebral infarction,the expression level of CD62p and CD63 was significantly higher(P＜0.01)than that of the stable phase and the normal control group.When the conditions of patients were stable,the expression level of CD62p and CD63 was significantly decreased but still higher than the normal control group(P＜0.01),and the expression level of CD62p was obviously positively correlated with that of CD63(r=0.788，P=0.003).In the acute phase of cerebral infarction,PAdT and PagT were both significantly increased than that of the normal control group,but they return to normal level when the illness comes to the stable phase. Conclusion CD62p and CD63,PAdT and PAgT change with the progression of cerebral infarction and show great correspondence,and they all involve in the occurrence and development process of pathogenesis of cerebral infarction.The expression level of CD62p and CD63 with higher consistent was more sensitive and accurate than PAdT and PAgT in reflecting the platelet activation status,it can be used as an important indicator for ACI diagnosis,observation of the disease course and prediction of the prognosis.

[Key words] Cerebral infarction;P-selectin;Lysosomal membrane protein53;PAdT and PAgT

急性脑梗死（ACI）是一种严重危害中老年人健康的缺血性脑损害性疾病。本病病因病机十分复杂，有研究表明，血小板的高活化状态在脑梗死形成过程中具有重要作用，是发生ACI重要危险因素之一[1-2]。为此，本研究拟通过对52例ACI

患者发病不同时程的血小板黏附率（PAdT）、血小板聚集率（PAgT）和血小板P-选择素（CD62P）、溶酶体蛋白（CD63）表达率的检测，进一步研究脑梗死发病过程中血小板的活化状态，明确血小板各项活化功能检测指标的相互关系与临床应用价值，为深入研究ACI发病机制和建立实验室诊断敏感指标提供科学的依据。

1 资料与方法

1.1 研究对象

脑梗死组：为2011年4月～2011年12月间笔者所在医院神经内科住院的脑梗死患者52例，其中男28例，女24例；年龄51～82 岁，平均（63.3±12.3）岁；临床诊断符合全国第五届脑血管病学术会议修订的标准，神经功能缺损程度评分（NDS）：轻型16例，中型28例，重型8例。排除肝肾疾病、肿瘤、感染、自身免疫性疾病和代谢性疾病。发病前2周内未服过阿斯匹林、潘生丁等影响血小板功能的药物和其他抗凝药物。

正常对照组：系30名来自笔者所在医院同期健康体检者，排除冠心病、高血压、糖尿病史等，与脑梗死组在性别、年龄上比较差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.2 主要试剂与仪器

1.2.1 主要试剂 单克隆抗体CD62p-FITC、CD63-PE、IgG1-FITC、IgG1- PE，均购自法国Immunotech公司。

1.2.2 主要仪器 流式细胞仪（EPICS-XL型，美国Coulter公司）、血小板粘附仪（中国医学科学院血研究所产品）、血小板聚集仪（PEA3200型，日本科学株式会社产品）。

1.3 方法

1.3.1 采血时间与标本制备 全部患者于发病的急性期（1～3 d）及稳定期（治疗的10～14 d）分别清晨空腹抽取静脉血，用106 mmol/L枸缘酸钠抗凝（血与抗凝剂比9∶1），以800 r/min离心5 min，取富含血小板血浆（PRP），用于CD62p与CD63测定。

1.3.2 CD62p与CD63测定 取200μL PRP以等体积2%甲醛固定，再用磷酸缓冲液（PBS）洗涤2～3次，调整血小板浓度为300×109/L，分别加入CD62p、CD63荧光单抗避光室温混匀孵育30 min，然后用PBS洗涤1次后，加入0.5 mL PBS重悬，采用流式细胞仪进行检测。测定中用CD41/sslog散点图设门，流速控制在100～200 s，每份标本测定5 000～10 000个血小板[3]。

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