急性脑梗死患者血清炎症因子mRNA表达与颈动脉斑块性质关系的临床研究

孙志华，李兰，康志新，贺婕

摘要：目的探讨急性脑梗死患者的炎症因子基因表达水平与颈动脉斑块的关系。方法对128例脑梗死患者、65例对照组外周血进行白介素6（IL6）、白介素10（IL10）、肿瘤坏死因子α（TNFα）mRNA表达的测定以及颈动脉超声检查颈动脉斑块情况。结果脑梗死组IL6、IL10mRNA表达水平与对照组比较差异有统计学意义（P<0.05），颈动脉不稳定斑块、高度狭窄的比例较对照组明显升高（P<0.05）。稳定斑块组IL6 mRNA、TNFαmRNA表达水平明显高于对照组，IL10 mRNA表达水平明显低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。结论急性脑梗死患者血清炎症因子基因表达水平与颈动脉斑块形成及其稳定性密切相关。

关键词：急性脑梗死；炎症因子；基因表达；颈动脉斑块

中图分类号：R743R255.2文献标识码：A

doi：10.3969/j.issn.16721349.2014.08.007

文章编号：16721349（2014）08091802

颈动脉斑块形态、粥样硬化的严重程度以及是否容易脱落成栓子等，在脑梗死的发病中起重要作用。炎症机制在动脉粥样硬化及心脑血管病病理损害的作用和地位日益受到人们的认可，众多炎症因子在此过程中起着重要的作用。本研究观察急性脑梗死患者血清炎症因子基因表达水平与颈动脉斑块的关系，为探索脑梗死有效的临床干预措施提供了新的思路。

1资料与方法

1.1研究对象病例组：急性脑梗死患者128例，符合下列条件：发病48 h内入院；符合第四届全国脑血管病会议修订的诊断标准，均经头CT和/或磁共振成像（MRI）证实；初发脑梗死，既往无神经系统疾病史。病例排除标准：既往患有免疫系统疾病、肿瘤；发病前后存在感染者；发病前后使用激素、免疫抑制剂、非甾体类抗炎药物；合并其他脏器严重并发症（心、肝、肾功能不全）；确诊系因动脉炎发病的脑梗死患者。对照组：收集同时期门诊常规体检的患有高血压、糖尿病、高脂血症、高黏血症等基础疾病者65例，其中男40例，女25例，年龄44岁～79岁（61.59岁±11.60岁），年龄、性别、伴随疾病等情况与脑梗死组比较差异无统计学意义。

1.2方法对两组患者外周血进行白介素6（interleukin6，IL6）、白介素10（interleukin10，IL10）、肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factorα，TNFα）mRNA表达的测定以及颈动脉超声检查颈动脉斑块情况。

1.2.1标本采集和总RNA提取所有研究对象于入组当天抽取静脉血5 mL，病例组采血必须在治疗前。血液标本采集后3 h内进行总核糖核酸（RNA）的提取。加入适量的Trizol裂解细胞，再依次加入适量的氯仿、异丙醇、75%乙醇和DEPC水，分别纯化、沉淀、洗涤和溶解总RNA。微量分光光度计测定RNA的浓度和纯度，吸光度D260 mm/D280 mm>1.80表明纯度高，可用于实验。

1.2.2反转录反应反应总体积10 μL，总RNA模板250 ng～300 ng，25 mmol/L MgCl2 2 μL，反转录反应缓冲液1 μL，各10 mmol/L的dNTPs混合物1 μL，RNA酶抑制剂0.25 μL，5 U/μL AMV反转录酶0.5 μL，Oligo dT Adaptor 0.5 μL，以无RNA酶的灭菌水补充体积至10 μL，混匀后稍离心。PCR仪上42 ℃反应30 min，然后99 ℃加热5 min，冰浴保存备用。

1.2.3荧光定量PCR引物序列由上海生物工程技术公司合成。反应总体积25 μL。反应条件：95 ℃预变性4 min；94 ℃变性15 s，72 ℃延伸15 s，40个循环，每一次循环后72 ℃采集荧光强度数据。65 ℃～94 ℃，每0.5 ℃读取一次制备溶解曲线。表达水平以目的基因与内参βactin的比值表示。

1.2.4颈动脉超声检查评价标准[1]根据斑块回声强度和形态特点，分为扁平斑、软斑、硬斑、溃疡斑4型，软斑和溃疡斑合称为不稳定斑块，余为稳定斑块。管腔直径狭窄百分比：狭窄程度=（1-d/D）×100%（D：远端正常管腔直径，d：最小残端直径）；狭窄程度>70%为重度狭窄。

1.3统计学处理采用SPSS13.0统计软件进行统计学处理。计量资料以均数±标准差（x±s）表示，采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1两组外周血IL6、IL10、TNFα mRNA表达水平比较脑梗死组IL6 mRNA表达水平明显高于对照组（P<0.05），IL10 mRNA表达水平明显低于对照组（P<0.05）。详见表1。

推荐访问:血清 炎症 因子 临床研究 患者