超高效液相色谱—串联质谱法测定洋葱中双炔酰菌胺

摘 要：本文采用液相色谱-串联质谱法，以乙腈和0.1%甲酸水溶液为流动相，建立一种新型卵菌纲杀菌剂双炔酰菌胺的检测方法。实验通过空白基质溶液稀释标准品建立校正的标准曲线，以消除基质效应。结果表明，双炔酰菌胺在10～400 ng/mL线性范围内具有良好的线性关系，相关系数为0.999，添加回收率在78.3%～83.4%，相对标准偏差（RSD）均小于1.0%。定量限为0.005 μg/kg，检出限为0.002 μg/kg。

关键词：液相色谱串联质谱；洋葱；双炔酰菌胺

Abstract：A method was developed for the determination of Mandipropamid in Onion by high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry. The mobile phase was acetonitrile-0.1% formic acid aqueous solution， The interference of matrix was reduced by the matrixmatched calibration standards curve. The linear range was from 10～400 ng /mL formandipropamid （r≥0.999）. The fortified recoveries were from 78.3% to 83.4% with relative standard deviations （RSD） less than 1.0%. The limits ofquantification were 0.005 μg/kg and the limit of detection were 0.002 μg/kg.

Key words：Liquid chromatography-tandem mass spectrometry； Onion；Mandipropamid

中图分类号：O657.63；TS255.7

双炔酰菌胺是一种新型酰胺类杀虫剂，英文名称为mandipropamid，其对绝大多数由卵菌引起的叶部病害和果实病害均具有很好的防治功效。可通过叶片被迅速吸收，一般与发病初期开始均匀喷雾，开花期、幼果期、中果期、转色期各喷药一次[1]。该产品对鱼、鸟、蜜蜂、家蚕均为低毒，随着它的使用和推广，日本、美国以及欧盟等均对其制定了或拟制定残留限量标准，2017年6月18日实施的GB 2763-2016食品安全国家标准《食品中农药最大残留限量》中对洋葱的最大残留限量为0.1 mg/kg，但目前该种杀菌剂残留分析方法的报道较少[2-5]。本研究采用乙腈提取洋葱中双炔酰菌胺，并结合HPLC /MS /MS对双炔酰菌胺进行了定性及定量检测，均取得了满意结果。

1 实验过程

1.1 仪器与试剂

超高效液相色谱-串联四级杆质谱联用仪（Waters TQD），配有电喷雾离子源、电子天平（感量0.1mg）、均质器、高速离心机、水浴超声提取器。

双炔酰菌胺标准品：CAS：374726-62-2，乙腈（色谱纯）、氯化钠（优级纯）、甲酸（优级纯）、甲醇（色谱纯）、水为符合GB/T6682-2008规定的一级水。

1.2 样品处理

取洋葱试样粉碎后并混合均匀，准确称取5 g试样，置于50 mL的离心管，用单标线移液管准确移取10 mL乙腈，室温超声提取30 min（注意水温不要过热，可用冰盒控制温度），加入1.0 g NaCl，渦旋混匀后冷藏静置30 min，以5 000 r/min离心5min，吸取上清液经0.22 μm滤膜过滤后待测。取空白样品，按照上述提取和净化过程进行处理，得到空白基质提取净化液。用此基质溶液和0.1%甲酸稀释标准中间液，配置成相应浓度的标准工作液。

1.3 色谱质谱条件

1.3.1 色谱条件

Waters BEH-C18柱（100 mm×2.1 mm×1.7 μm）；流动相：A液为乙腈，B液为0.1%甲酸水溶液，梯度洗脱，洗脱程序见表1；柱温，40 ℃；进样量，

10 μL；流速，0.2 mL/min。

1.3.2 质谱条件

ESI源，正离子模式；多反应监测；毛细管电压，3.5 kV；离子源温度，150 ℃；脱溶剂气及锥孔气，N2；脱溶剂气温度，400 ℃；脱溶剂气流量，800 L/h；锥孔气流量，150 L/h；碰撞气，高纯氩气；保留时间、监测离子对、锥孔电压及碰撞能量见表2。

1.4 定性测定

试样中目标化合物色谱峰的保留时间与相应标准色谱峰的保留时间相比较，变化范围应在±2.5%之内。待测化合物的质谱定性离子必须出现，至少应包括一个母离子和两个子离子，且样品中目标化合物的两个子离子的相对丰度比应符合表3。

2 结果与讨论

2.1 母离子和子离子的选择

将1 mg/L的待测化合物标准溶液分别以流动注射的方式进样，进行母离子全扫描，确定双炔菌酰胺的母离子质量数。用0.1 mg/L的待测化合物标准溶液分别对毛细管出口电压进行优化，从中选出丰度最高的毛细管出口电压作为最佳毛细管出口电压。然后分别对子离子及碰撞能力进行优化，从中选出丰度最高的碰撞能量作为最佳碰撞能量，选择两个丰度比较高的子离子作为定性和定量离子，建立多离子反应检测（MRM）模式，多反应监测（MRM）色谱，见图1。

2.2 提取条件

色谱柱选择常用的反相填料，Waters BEH-C18柱。根据双炔菌酰胺的溶解性，选择乙腈作为提取剂，通过实验发现，选择乙腈和0.1%甲酸水溶液可以得到更好的峰形和分离效果。将流动相按照不同比例在色谱柱上进行实验，最终确定采用梯度洗脱方式可以有效分离待测物，所得待测物峰形对称，基线平稳，并且分析时间较短。

2.3 线性范围

按上述提取过程处理空白样品，制得空白基质提取液。用此空白基质提取液和0.1%的甲酸溶液将标准液稀释成浓度为10、20、50、100、200、400 ng/mL的系列标准工作液，用LC/MS/MS进样分析，双炔酰菌胺的浓度为横坐标，双炔酰菌胺的峰面积作为纵坐标绘制标准曲线，得到线性方程y=566.7x+5732，其线性相关系数为0.999，分别见图2和表4。

2.4 检出限和精密度和准确度试验

用空白基质溶液稀释标准曲线上的最低浓度出峰时，信噪比S/N=3时，和样品处理过程的稀释倍数计算得到方法检出限（LOD）。取信噪比S/N=10和样品处理过程的稀释倍数计算得到定量限（LOQ）。称样量为5 g时，定容体积为10 mL时所对应的检出限为0.002 μg/kg，定量限为0.005 μg/kg。

在阴性洋葱样品中添入两个不同濃度水平的双炔菌酰胺标准溶液，按照上述前处理方法处理，进行回收率试验，每个水平重复6次，所得精密度结果见表5，双炔菌酰胺在洋葱中添加回收率在77.3%～84.7%，相对标准偏差均小于1.0%。

3 结论

试验结果表明，本方法提取方式简便易操作，且精密度及准确度均较高，分析时间短，线性关系佳，可对洋葱中双炔菌酰胺残留量在定性测定的同时定量分析。

参考文献：

[1]刘长令.世界农药大全：杀菌剂卷[M].北京：化学工业出版社，2006.

[2]Banerjee K，Oulkar DP，Patil SB，et al. Multiresidue Analysis of 50 Pesticides in Grape， Pomegranate， and Mango by Gas Chromatography-Ion Trap Mass Spectrometry[J].Agric Food Chem，2009（57）：4068-4078.

[3]顾保权，朱伟清，范文政.吡螨胺的合成[J].世界农药，2003，25（3）：45-47.

[4]XiaochunSun，GuipengYang. Analytical Method for the Determination of Residues ofProthioconazole in/on Cereals and Oilseed Rape by HPLC withElectrospray ionization and MS/MS-detection[J].Pflanzenschutz-Nachrichten Bayer （English Edition），2004，57（2）：181.

[5]崔国葳，鲁洪涛，于乐祥，等.新型杀菌剂双炔酰菌胺的研究进展[J].世界农药，2010，32（2）：35-38.

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