不同检验方法对肺结核早期诊断的应用

摘要：目的：结合临床实践经验，探讨不同检验方法对肺结核早期诊断的应用。方法：采用对照研究法，选取2008年1月-2009年12月期间，对我院收治的56例肺结核患者的痰、胸水、血清进行多种方法检验，包括涂片结核菌检查、聚合酶链反应（Polyerase Chain Reaction PCR）和及皮肤结核菌素纯蛋白衍化物（PPD）试验，并选取同时期的非结核患者作为对照组，比较检验结果，以确定不同检验方法在诊断上的应用意义。采用MicrosoftExcel建立数据库，运用SPSS 13. 0统计软件进行统计分析。结果：56例结核病患者和54例非结核病患者的痰和血清及23例胸腔积液患者的胸水均做了上述3种方法的检测，①两组痰标本经PCR检测结果显示，结核病组的PCR检测阳性率为62.50%（35/56），非结核病组有4例呈假阳性（7.41%），其余均阴性。血清中PCR检测阳性率为37.50%（21/56），非结核组为9.26%（5/54）。结核胸膜炎胸腔积液23例患者的胸水接受PCR检测，其阳性率为89.96％（20/23），3例呈阴性，之后经胸膜活检以及抗结核治疗吸收而证实。②痰和胸水涂片作抗酸杆菌检查，结核病组阳性率为23.21%（13/56），其中痰标本5例，胸水标本6例，非结核病组均为阴性。③PPD皮试结果，结核病组的阳性率为32.14%（18/56），非结核病组阳性率为20.37%（11/54）。三种方法结核患者检出率差别有统计学意义，PCR检测阳性检出率明显高于其他两种方法的检出率（P<0.05）。结论：PCR检测方法快捷简便、灵敏度高，该技术对临床上可疑肺结核病的诊断和鉴别诊断有较高的应用价值，值得临床推广应用。

关键词：涂片结核菌检查聚合酶链反应皮肤结核菌素纯蛋白衍化物试验肺结核早期诊断

结核病是由结核分枝杆菌引起的传染性疾病，尤以肺结核最为常见，是一种严重危害我国人民健康和影响国民经济发展的重要传染病[1-3]。肺结核主要通过呼吸道传播，因此。尽早确诊肺结核病、控制传染源成为预防肺结核病的重要途径[4]。为提高对结核病的早期诊断率，笔者选取我院患者为研究对象，开展对照研究，对患者的痰、胸水、血清实施涂片结核菌检查、聚合酶链反应（Polyerase Chain Reaction PCR）以及皮肤结核菌素纯蛋白衍化物（PPD）试验，现将结果报道如下：

1对象与方法

1.1研究对象

选取2008年1月-2009年12月期间，对我院收治的56例肺结核患者以及54例非肺结核患者为研究对象，男62例，女34例，年龄16～79岁，平均41.74±3.44岁。

所有肺结核患者根据临床诊断，包括体征、病史、临床表现、胸部X线细菌学检查和抗结核治疗有效而确诊[5]，部分患者接受CT、胸膜活检、纤支镜检查而确诊，非结核经病理学检查，患者病情分类见表1。

1.2研究方法

采用对照研究法，对我院收治的56例肺结核患者的痰、胸水、血清进行多种方法检验，包括涂片结核菌检查、聚合酶链反应（Polyerase Chain Reaction PCR）和及皮肤结核菌素纯蛋白衍化物（PPD）试验，并选取同时期的非结核患者作为对照组，比较检验结果，以确定不同检验方法在诊断上的应用意义。采用MicrosoftExcel建立数据库，运用SPSS 13. 0统计软件进行统计分析。

1.3检验方法

标本取痰标本为患者晨起深呼吸后，由肺部深处咳出的分泌物。同时送涂片和PCR检测。① 涂片法：采用WHO推荐的国际通用螺旋盖痰瓶收集痰标本，痰涂片标本及时送检，用改良齐—尼氏法进行抗酸染色，并用显徽镜检查，阳性标准为：观察100个视野，发现3～9条者。②PCR诊断：由军事医学科学院放射医学研究所提供的引物及PCR诊断试刺盒进行检验。NDA标本取痰（0.5mL）加1N的NaoH溶液（5μL），37℃温度下放置40min后，离心5min，转速10000rpm。将上清丢弃，并用生理盐水洗至中性备用。取1.0mL胸水和血清，离心、沉淀后加入50μL裂解液沸水浴10min，离心5min，转速10000rpm。取5μL上清液，作为TB-DNA模板。然后取15μL反应液加入0.2μL的Taq酶，混匀后加入石蜡油20μL封顶，再加入5μL，标本DNA液，离心后扩增，分别设置为90℃（30s）、55℃（30s）、72℃（60s），共循环35次，取10～30mLPCR扩增液直接上样于2％琼脂糖凝胶进行电泳，阳性标准为：在紫外线下观察有160bp的橙黄色荧光带。③皮肤PPD试验：卫生部上海生物制品研究所北京华怡生物技术公司提供的PPD液，于左前臂内侧皮内注射（0.1mL），阳性标准为：72h观察局部肿结直径大于5～10mm。

2结果

56例结核病患者和54例非结核病患者的痰和血清及23例胸腔积液患者的胸水均接受上述3种方法的检测，①痰标本与血清标本PCR检测结果结果详见表2与表3。结核胸膜炎胸腔积液23例患者的胸水接受PCR检测，其阳性率为89.96％（20/23），3例呈阴性，之后经胸膜活检以及抗结核治疗吸收而证实；②痰和胸水涂片作抗酸杆菌检查，结果详见表4。③PPD皮试结果，结核病组的阳性率为32.14%（18/56），非结核病组阳性率为20.37%（11/54）。三种方法结核患者检出率差别有统计学意义，PCR检测阳性检出率明显高于其他两种方法的检出率（P<0.05）。

3讨论

肺结核是呼吸科临床工作中的常见病，由于其临床表现复杂多样，仅依靠体征、病史、临床表现及X线等检查难以做到准确判断，误诊率较高。为保证患者及时得到有效的治疗，必须寻找到更好的诊断方法，以有助于疾病的早期诊断。

本组PCR检测结果显示，结核病组的PCR检测阳性率为62.50%（35/56），非结核病组有4例呈假阳性（7.41%），其余均阴性。血清中PCR检测阳性率为37.50%（21/56），非结核组为9.26%（5/54），其检出阳性率明显高于涂片法和PPD皮试法，其中胸水接受PCR检测的阳性率高达89.96％（20/23），与国内相关文献报道的59%～89％结果基本相符，提示此种方法的有效性。临床研究证明，从外周血中进行结核杆菌检测主要是因为结核患者局部病灶内的结核杆菌可以通过血行播散或通过吞噬细胞的吞噬和淋巴液回流等途径进入血流，此种方法快捷简便、灵敏度高，与其他方法比较，该技术对临床上可疑肺结核病的诊断和鉴别诊断有较高的应用价值，值得临床推广应用。

参考文献：

[1]林志新，吴义萍，李迎春等，49例下叶肺结核的临床特点及诊断程序分析[J]，临床肺科杂志，2010，15（11）：1547-1548.

[2] Redha Souilamas，Marc Riquet， Francoise Le Pimpec Barthes， et a.l Surgical treatment of active and sequelar forms of pulmonary tuberculosis[J].Ann Thorac Surg， 2008， 71： 443-447.

[3] 廖鲁燕，纤维支气管镜检查在痰涂片阴性肺结核诊断的应用价值[J]，临床荟萃，2010，2（21）：1895-1896.

[4]张云娇，张秀玲.1999-2004年痰涂片阳性肺结核检出结果分析[J]，中国感染控制杂志， 2009： 5（1）： 56-57。

[5]赵平，张淑芳，高文慧等，北京市朝阳区肺结核病患者细菌学检验结果分析[J]，中国卫生检验杂志，2008，18（9）：1821-1822.

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